Дата: Понедельник, 22.Окт.2012, 10:15 | Сообщение # 1
Участник
У вас сообщений: 58
инженер
OFFлайн
Российская Федерация
Казань
Всем доброго времени суток. Со временем отложилось в мозгу информация, что на анализаторах можно использовать ЕДТА К2 или К3, но нельзя использовать кровь с цитратом. В КЩС насколько помню используют гепарин и категорически нельзя ЕДТА. Помогите разобраться кто есть кто и разложить по полочкам. Может у кого есть статейки какие почитать.
Дата: Понедельник, 22.Окт.2012, 21:39 | Сообщение # 4
У вас сообщений: 369
врач КЛД, техник-электрик
OFFлайн
Российская Федерация
Воронеж
Молекула этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) содержит четыре -СООН группы, по форме похожа на клещи (хелатное соединение). Ее динатриевая соль - Трилон Б, калиевые соли К2 ЭДТА и К3 ЭДТА, соответственно 2- и 3- замещенные, содержатся в пробирках для гематологии с фиолетовыми крышками в виде напыления или р-ра . Их задача связать ионы кальция (кальциевая соль ЭДТА нерастворима) и не допустить образования сгустка. Микросгустки искажают результат за счет агрегации форменных элементов и забивают апертуры.
В коагулологии (свертывающей системе крови) широко применяется 3-х замещенный цитрат натрия. Он связывает кальций крови, не нарушая соотношения форменных элементов и плазменных факторов свертывания. Реакцию свертывания запускают, добавляя в плазму хлорид кальция и тот или иной реактив, например тромбопластин, и определяют время образования сгустка.
В двух этих случаях важно соотношение крови/антикоагулянта, для венозной и капиллярной оно разное. Есть коэфффициент пересчета и т.д. Растворы этих солей являются хорошими буферами, т.е. они имеют определенный pH и способны его поддерживать, что не всегда хорошо.
При исследованиях КОС (кислотно-основного состояния) кровь берут под слой вазелинового масла и лучше с гепарином. Гепарин является мукополисахаридом, состоящим из остатков глюкуроновой кислоты и глюкозамина. Он не меняет КОС крови. Гепарин активирует работу антитромбина 3, тот блокирует факторы свертывания, кажется IX-XII, точно не помню. Естественно в тестах коагулологии применять его нельзя, т.к. там исследуют активность факторов свертывания, а он их блокирует.
А в пробирках с ЭДТА нельзя определять ионизированный кальций - он переходит в нерастворимую форму соли ЭДТА. Короче для каждой методики - свои пробирки, рекомендованные разработчиком и очень важно объем крови !!! и перемешивание (аккуратно) содержимого с антикоагулянтом. В сети много информации. Можно подробно почитать. В теме, указанной Вами много всего гениального и мне не конца понятного :-) Участники ушли от темы. Что-то вроде разговора в курилке, по-моему.
Пока по поводу ЭДТА. то есть К3 более активный? правильно понимаю? требуется меньшее количество для нужного эффекта В инструкциях иногда действительно прописано только К2. Повлияет ли использование К3 на подсчет тромбоцитов. Или при соблюдении соотношения кровь/ЭДТА проблем не должно быть. По сути конечно достаточно ответа ДА или НЕТ , но интересно же до сути докапаться
Насчет активности не знаю. Врать не буду. Когда я работал в б/х лаборатории, коагулологию делал в стеклянных градуированных пробирках, мы их силиконировали, вносили цитрат натрия, отдавали в процедурный. Последние 12 лет работаю в ИФА-лаборатории (ВИЧ,гепатиты и т.д.). Поэтому вплотную этими тонкостями не занимался, и на анализаторах такого типа не работал. Вероятно р-ры К2 ЭДТА и К3 ЭДТА имеют разный pH и буферную емкость. Мне кажется лаборанту и инженеру вообще все это не актуально. Есть готовые пробирки для определенного типа исследований (коагулология, гематология, серология). В зависимости от этого выбираем. Мы же не сами вносим антикоагулянт, правда? Некоторые производители выпускают пробирки для гематологии с к2 и к3 одновременно. И они все уже прикинули и протестировали. Главное эта пробирка при взятии крови всегда вторая! Сначала 1-2 мл крови в красную, затем в фиолетовую крышку. И перемешать. В момент пункции вены идет тканевой тромбопластин, он искажает результаты. В сети почитайте. Вот навскидку ТУТТУТ и вот ТУТ например. Можно на сайтах задать вопросы.
По поводу второй пробирки первый раз слышу, все лаборатории с которыми работаем такого точно не соблюдают. Спасибо, учту на будущее. По поводу актуальности отчасти согласен, тут все просто кому то интересно, кому то нет. Все таки иметь общее представление о том с чем пересекается твоя деятельность всегда полезно. Хотя бы вопрос уже можно будет грамотно задать при случае =)
Собственно суть в чем - когда брали кровь в градуированное стекло с цитратом, советовали медсестрам брать самотеком, а первые капли - в сухую пробирку. А с вакуумом вот так, как написал - вторая пробирка, даже если она одна. Посоветовали на специализации в ВГМА. Не знаю, следуют совету коллеги, или нет. Все стоит денег, а их на лампочку в санузле (пардон) можно полгода выбивать :-)
Вопрос о к3 и к2 актуален на гематологических анализаторах дифференцирующем гранулоциты если работать в педиатрии то к2 значительно повышает общую воспроизводимость результатов и не искажает лейкоформулу. Цитрат натрия 3,8% используется в коагулологии но соотношение образца идет в зависимости от показателя гематокрита полученного на гематологическом анализаторе. На агрегацию тромбоцитов кровь брать лучше в пробирку с гирудином т.к он подавляет активность тромбина не нарущает функциональное состояние клеток крови На все кщс рекомендуется брать в гепаринизированный шприц или капилляр и результаты хорошие и анализатор не испортится
Дата: Четверг, 25.Окт.2012, 11:31 | Сообщение # 10
У вас сообщений: 369
врач КЛД, техник-электрик
OFFлайн
Российская Федерация
Воронеж
Очень интересно, знаю что педиатрические пробирки имеют малый объем 1-2 мл, а насчет К2 и К3 ЭДТА - и тот и другой используют, судя по каталогам Vacuette Выйду на работу, спрошу в клинич. лаборатории. Сам на гематологич.анализаторах не работал, но поинтересуюсь - как у них. Ваши данные о лучшей воспроизводимости к2 - из опыта работы или литература есть? Любопытно что-нибудь глянуть об искажении формулы в случае использования к3. Если можно, бросьте ссылку. Когда ставил тесты свертывающей ручным методом, была табличка - сколько добавить цитрата при патологичном гематокрите (обычно 0,02-0,05мл). Как правило мало что менялось. При норме не корректировали, т.е. 0,5цитрата+4,5мл крови=5мл. Сейчас, конечно методики поменялись и технологии. Но на практике кровь забирают одномоментно, вряд ли потом кто-то учитывает показатель гематокрита и по нему соотношение кровь/цитрат. Если честно, плохо представляю себе практическую сторону вопроса - повторный забор крови? или добавление антикоагулянта в пробирку вручную? Вроде и не новичок в лабораторном бизнесе, но как говорится век живи - век учись. :-)))
Сообщение отредактировал swin - Четверг, 25.Окт.2012, 11:33
Дата: Пятница, 16.Авг.2013, 12:51 | Сообщение # 11
Стажер
У вас сообщений: 9
Зав. отделом ифа и кдл
OFFлайн
Российская Федерация
спб
Добрый день! тема вроде как давняя а мне очень надо поинтересоваться. Не первый раз слышу про пробирки с герудином, однако нигде не могу найти толковую информацию по нему - производители не делают и где брать их непонятно Проблема в том что у нас в институте у животных берут кровь в пробирки с ЭДТА, и с тромбоцитами по результатам полная беда, видимо не хватает активности ЭДТА что бы свертывание остановить... мы и в разведении пробовали и по всякому. может кто сталкивался и подскажет? а может кто знает как этот герудин достать?
Дата: Воскресенье, 18.Авг.2013, 19:05 | Сообщение # 13
У вас сообщений: 369
врач КЛД, техник-электрик
OFFлайн
Российская Федерация
Воронеж
Вообще гИрудин ( лат. hirudo - пиявка). И вообще может не в пробирках дело. Преаналитический этап : кто берет, как берут, как скоро доставляют в лабораторию, условия. Аналитический этап: что с прибором, техобслуживание, внутрилабораторный контроль качества. Сходимость/воспроизводимость, точность/правильность.
P/s По зверушкам есть форумы ветеринаров, лабдиагностика там тоже обсуждается. Случайно забредал, не помню ссылку, погуглите.
Сообщение отредактировал swin - Воскресенье, 18.Авг.2013, 19:10
Дата: Вторник, 20.Авг.2013, 11:19 | Сообщение # 14
Техник
У вас сообщений: 393
Врач КДЛ / FSE
OFFлайн
Российская Федерация
Большой
Традиционно, конечно, говорят про пробирки "для БХ", "для иммуно-логии-граммы-статуса", ПЦР, гемостаза и т.п., но главный критерий выбора пробирки - инфа из методики, которую предполагается использовать.
Периодически всплывают "проблемы", когда народ берет пробирки "для нестабильных гормонов" с ЭДТА-апротинином, а потом жалуются на низкие значения... а во вкладыше к набору буржуйским по белому "не рекомендуется использовать ЭДТА-плазму из-за значительного снижения результатов".
Вобщем, методика конкретного производителя - наше всё. Там и срок стабильности, и условия хранения, и тип пробирки указан.
Вопрос о К2/К3 ЭДТА трудён и не однозначен... Говорят, исторически Культер разрабатывал метод под К2-ЭДТА, учитывая меньшее осмотическое повреждение эритроцитов, по сравнению с К3. Сейчас геманализаторы равно воспринимают и К2 и К3, разница между ними в длительности сохранности пробы. Производители вак. пробирок рекомендуют пробу с К3 хранить не больше 4 часов до прибора, с К2 - по разным данным можно до 6-8 часов. Дальше тромбоциты агрегируют и начинается врака: тромбоциты ложно падают и агрегаты симулируют микроциты. Дольше - вряд ли возможно, и осмотическое изменение эритроцитов, и агрегация тромбоцитов... :(
Для получения плазмы рекомендуют сейчас гепаринат лития. Литий не дает искажений на K и Na, но нельзя применять для подбора дозы Li-препаратов в психиатрии. Гепаринат натрия и аммония по той же причине неприменимы для измерения Na и продуктов азотистого обмена.
Если цитратные пробирки используются не для гемостаза, то нужно помнить о разведении крови, цитрата в пробирке - 10% от суммарного объема пробы.
Сообщение отредактировал Клифф - Вторник, 20.Авг.2013, 11:22
Доброго времени суток, коллеги. У меня в одной из лабораторий на Hemoluxe 19 венозная кровь идёт отлично, а вот на капилярной у грудных детей ни в какую не хочет измерять лейкоцитарную формулу, взрослым всё хорошо промеряет. Почти на 100% уверен, что прибор исправен, а проблема на этапе пробоподготовки (вакутейнеры не те, какие надо). Но вот странно, что именно у грудных детей не промеряет. Лаборанты вредничают и утверждают, что через раз и у взрослых приходится перемерять, чтобы формулу посчитал, но при мне таких образцов не было - упёрлись, что прибор неисправен. Может кто сталкивался с такой проблемой, и сможет подсказать, как донести до их светлых головушек, что прибор исправен? Заранее, спасибо.
Дата: Пятница, 08.Дек.2017, 08:05 | Сообщение # 17
Стажер
У вас сообщений: 39
Разработчик, производитель
OFFлайн
Российская Федерация
Уфа
Скорее всего не выдерживается пауза между забором крови и анализом (с вероятностью 95%). При работе с капиллярной - минимум 10 минут. Из вены, по уважаемым источникам, можно делать в течении первых 5 минут, потом пауза 30. Из личного опыта (эксперименты проводили неоднократно): только что взятая WBC - 12 (лимфоцитоз), через 10м - 6,8 (LYM - чуть выше нормы), через - 30 - 6,2 все в норме. В "день грудничка" в поликлинике караул, и врачи стараются сделать все быстро... При взятии из пальца, особенно "нашими" скарификаторами в кровь чего только не попадает: и тканевый фактор, и коллаген, и межклеточная жидкость и т. д. Все это запускает свертывающую систему, активирует тромбоциты, которые образуют агрегаты. Именно они искажают общее количество и формулу подсчета лейкоцитов. Со временем, без фибрина, агрегаты распадаются. Цитата:[b] т. Саахов ф. "Кавказская пленница": "Торопиться не надо!".
Российская Федерация
